Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐延展

从第一次消失家兔自身抗体到消失1HG哮喘临床疼痛的令人满意率在学龄前时期就有很好的详细描述，多个家兔自身抗体乙型肝炎的学龄前中所有70%在抗体转换后10周内身患哮喘，而随访15年的学龄前这一百分比减小到84%。即便如此，分之一临床1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的确诊有助于还未得不到充分的研究课题。

愈发多的人开始适用分期系统来度量1HG哮喘的令人满意：个锥体在消失多种家兔自身抗体时转入第1过渡期，消失血糖异常时转入第2过渡期，消失疼痛时转入第3过渡期。一些多发家兔自身抗体乙型肝炎的个锥体，在1期和2期，令人满意较更慢，并工业发展为确诊的1HG哮喘。我们之前详细描述了都由成员在首次测定到多种家兔自身抗体试样后至再加10年无哮喘的极更慢令人满意者，这组成员高血压总数再加，但形态非常明确。随后，我们发现家兔自身肝细胞特异性CD8+T细胞反应器反不应在令人满意缓更慢的高血压中所基本不依赖于，但在近期确诊和长期依赖于的哮喘高血压中所很容易测定到。这显然表明，与令人满意高血压比起，这些高血压自身免疫反不应的调节增强。

后期研究课题表明，尽管调节性T细胞反应器(Treg)数量出现异常，但哮喘高血压依赖于一些动态缺失，其中所仅限于对IL-2的反不应能力降低。此外，哮喘高血压中所的效不应CD4+T细胞反应器显然对调节凸显抵抗性，观感为效不应T细胞反应器的抑制作用增强，自然产生的Treg和锥体外产生的正向Treg，以及肝细胞经历的CD4+T细胞反应器中所IL-2反不应增强。本研究课题的目的是详细描述了CD4+调节性T细胞反应器(Treg)在这群人极缓更慢令人满意者中所的形态，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以成年人为基础的纵向研究课题，在21岁以下患病的高血压亲属中所锥体检1HG哮喘的危险环境因素。我们之前详细描述了长期缓更慢令人满意者的形态，他们保持多重家兔自身抗体乙型肝炎超过10年，但未消失哮喘的临床疼痛，更慢性或非同步进行性自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量血液试样的缓更慢令人满意者扩及T和B细胞反应器动态系统性。在目前的研究课题中所，8名更慢令人满意者(SP组成员)，中所位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身抗体乙型肝炎。所有的参与者都始终保持1HG哮喘令人满意的1期，尽管一些人随后丧失了家兔自身抗体对某些肝细胞的乙型肝炎反不应，然而，一名高血压仍未始终保持2期至再加6年，但未消失临床疼痛，一名高血压被诊疗为哮喘，该测试者72岁，在采集实验试样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中所对该NADP同步进行了分开审计。分开外周血单个反应器细胞反应器(PBMCs)，采用多变量流式细胞反应器术和T细胞反应器抑制作用检验审计NADP中所Treg的频率、表HG和动态。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、总括和回归)同步进行无统筹聚类系统性，审计Treg表HG。

结果：与肥胖NADP比起，来自更慢令人满意锥体的遗忘CD4+T细胞反应器的统筹聚类推断，触发的遗忘CD4+ Treg频率减小，与糖皮质激素正向的TNFR无关酶(GITR)理解减小有关。一名HbA1c升温的高血压与令人满意缓更慢者和也就是说的依此组成员比起，Treg著者有所多种不同。动态系统性表明，与肥胖NADP比起，来自缓更慢令人满意锥体的Treg介导的CD4+效不应T细胞反应器抑制作用明显损毁。观感为对效不应CD4+T细胞反应器CD25和CD134理解的抑制作用减小。

绘成1 深入的表HG系统性推断，CD4+Treg亚HG在更慢令人满意队列中所减小。由FlowSOM填充的Treg房，围住在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -细胞反应器上。根据标识物理解断定成10个元簇:遗忘T细胞反应器_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞反应器;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞反应器;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)适用9个多种不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个终端均是由一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在终端组成员周围装裱。每个终端中所的饼绘成指成单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热绘成，以推断整锥体标识理解。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)填充绘成，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对于总质量为每个metacluster箱该线绘成(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞反应器(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞反应器(l)。橘色白点均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于绘成形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘成2 适用CITRUS的预测模HG断定，Treg频率的减小是令人满意缓更慢的标志。分级除此以外(a - f)和甜菜系统性(g-k)比起较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞反应器上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的别具特色绘成。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR理解同步进行分开，模拟FlowSOM群锥体。(b) HD(环纹)和SP(斑点)组成员以及NADPSP 606(橘色)中所CD25+ cd127的频率核心内容绘成。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外有界的箱该线绘成;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解风速后处理，标记成彩的簇被识别为SP和HD队列之间的多种不同。(j)箱该线绘成推断了在SP(斑点)和HD(灰点)组成员中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对于总质量(百分比)。(k)直方绘成推断每个簇的表HG(粉红色)和Treg标识相对于理解与历史背景理解(红色);上列，存储器Treg_3;上头恰巧，存储器Treg_4。历史背景与所有其他簇中所标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成3 与肥胖献血者比起，令人满意缓更慢者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T细胞反应器元簇(遗忘T细胞反应器_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞反应器;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞反应器;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个理解标识的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热绘成(sp606不仅限于在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(黄褐色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR理解串连，推断直方绘成(c)和核心内容绘成(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有NADP仅限于，p< 0.05(红色)NADPSP 606和也就是说的HD不仅限于在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR理解，从分级除此以外，从所有HD(黄褐色)、所有SP(红色)和SP 606(橘色)串连，推断直方绘成(e)和核心内容绘成(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

绘成4 来自缓更慢令人满意的CD4+ treg细胞反应器控制效不应CD4+T细胞反应器的能力降低。SP组成员用红色的该线和白点指成，HD组成员用黑色的该线和白点指成，橘色的该线/白点指成NADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞反应器同步进行分选。CD4+CD25−(不；也者)被标识为CFSE, Treg按判读的百分比试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞反应器，培育成3天后同步进行流式细胞反应器术测定。(a-d)与CD4+不；也者相对于不应的treg培育成(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD不；也者培育成。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE抑制作用多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用多于。适用乙型肝炎依此(触发的响不应细胞反应器下同treg)计算抑制作用多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

绘成5 效不应CD4+T细胞反应器对缓更慢令人满意的T细胞反应器再造的抑制作用更脆弱。SP组成员用红色的该线和白点指成，HD组成员用黑色的该线和白点指成，橘色的该线/白点指成NADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞反应器同步进行分选。CD4+CD25−(不；也者)被cfsel标识，treg按判读的百分比试样。用抗CD3 /28微珠再造细胞反应器，培育成3天后同步进行流式细胞反应器术(CD25反染)和细胞反应器因叔父系统性。HD Treg与HD、SP或sp606不；也者主导培育成。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE抑制作用%-(b)。(c,d) CD25抑制作用%-(c)和CD134抑制作用%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育成中所的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

正确性：我们计算成来的正确性是，来自缓更慢令人满意叔父的再造遗忘CD4+Treg在GITR理解中所得不到了扩展和丰富，务实了再进一步研究课题Treg在1HG哮喘几率个锥体中所的异质性的不足之处。

原文成处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28